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服务简介:

  荧光素酶报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测荧光素酶活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在荧光素氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪(化学发光仪)测定荧光素氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。

  双荧光素酶体系,即有两种荧光素酶,比较常见的组合是萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶,萤火虫荧光素酶作用于甲虫荧光素,而海肾荧光素酶在氧的存在下作用于海肾荧光素。以其中一个作为内参对照,即表达量基本恒定,用于减少试验中不同处理间所固有的变化,包括培养细胞的数目及活力的差异,细胞转染及裂解的效率,而另外一个荧光素酶则作为报告基因,用于指示不同处理条件下基因的表达情况。

应用方式:

  1.鉴定顺势作用原件或反式作用因子;

  2.用于鉴定miRNA的靶标基因:miRNA通过碱基配对结合到靶mRNA的3’UTR区,抑制靶基因的翻译或对靶基因mRNA的降解达到调控基因表达的目的。将靶mRNA的3’UTR区构建至萤火虫荧光素酶报告基因的3’端,与miRNA表达载体及海肾荧光素酶报告基因载体共转染细胞,先后加入两种底物荧光素,通过对荧光素酶报告基因的表达检测确认miRNA对靶基因的调控效果。

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